外泌體大家應該都很熟悉。1983年，在綿羊網織紅細胞中發(fā)現(xiàn)了現(xiàn)在生物學研究領域炙手可熱的“小網紅"——一種特殊囊泡結構，并與1987年正式被命名為“exosome"。

外泌體是指包含了復雜 RNA 和蛋白質的小膜泡 (30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。為細胞間通訊的重要媒介，它像一個信使，為細胞與胞外環(huán)境傳遞信息，保障機體的正常工作。

越來越多的科研人員投入到外泌體的研究中，根據(jù)PubMed統(tǒng)計顯示，最近幾年，外泌體研究呈爆炸增長。

外泌體的研究離不開細胞培養(yǎng)。以腫瘤相關外泌體研究為例，目前，收集腫瘤細胞外泌體主要有兩種方法：

方法一

使用正常培液養(yǎng)細胞再換無血清培液收外泌體。

方法二

直接使用exosome-free FBS配制培養(yǎng)基用于培養(yǎng)細胞收外泌體。

從現(xiàn)有的一些研究可以看出[1][2][3][4][5]，研究人員更傾向于方法二，也就是使用exosome-free FBS培養(yǎng)細胞再收上清分離exosomes的方法，至少腫瘤研究方面是這樣的。

相關文獻[1] Zhou W , Fong M , Min Y , et al. Cancer-Secreted miR-105 Destroys Vascular Endothelial Barriers to Promote Metastasis[J]. Cancer Cell, 2014.

[2] Boelens M , Wu T , Nabet B , et al. Exosome Transfer from Stromal to Breast Cancer Cells Regulates Therapy Resistance Pathways[J]. Cell, 2014, 159(3):499-513.

[3] Pancreatic cancer exosomes initiate pre-metastatic niche formation in the liver[J]. Nature Cell Biology, 2015, 17(6):816-826.

[4] Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis[J]. Nature, 2020, 2015，527(7578):329-35.

[5] Melo S A , Luecke L B , Kahlert C , et al. Glypican-1 identifies cancer exosomes and detects early pancreatic cancer[J]. Nature, 2015, 523(7559):177-182.

所以，接下來就講講exosome-free FBS——無外泌體血清。

顧名思義，無外泌體血清就是外泌體含量極低，低到幾乎沒有的血清（以粒徑分析結果為標準），獲得主要有兩種途徑：

直接購買商品化的產品

自己DIY制備

如果選擇自己制備無外泌體血清，常用的方法就是超速離心法。主要有三種策略：（前提是將血清用正確的方法*解凍，分裝，按照實驗需求選擇合適用量進行去除外泌體的實驗，血清解凍方法請參照這里??：如何解凍血清才能大程度保證活性？）

將血清與培養(yǎng)基1：4比例稀釋，然后超速離心10000g過夜收集上清；

直接將血清速離心10000g過夜收集上清；

180000g離心3-6小時收集上清。

P.S.其中，離心的過夜時間要視情況而定，一般在10-14小時之間，也可適當延長離心時間。

需要注意的是，離心后，外泌體會富集在試管底部，在吸取上層血清的時候，不要觸碰底部沉淀，避免吸到沉底的外泌體，“一夜回到解放前"。

另外，只吸取80%左右的上層血清，其余的渾濁血清留作其他非外泌體用途細胞的培養(yǎng)，畢竟血清也挺貴的，避免不必要的浪費。

針對超速離心后的血清，可進行粒徑檢測（離心前樣品和離心后樣品），如果覺得純度不夠，再把離心后收集的血清做二次離心。

當然啦，以上方法也只是我們根據(jù)已有文獻和相關實驗室的經驗總結得來的，僅供大家參考，如果有更好的方法，也歡迎在評論區(qū)和我們交流！

選擇自己手動DIY無外泌體血清，可以在一定程度降低血清的成本，Ausbian血清，高品質，實驗更安心，用來DIY成外泌體實驗專用血清也是不錯的選擇。

1. 1、精選內毒素更低批次（≤3EU/ml）。是細胞典藏等重大項目十幾年的穩(wěn)定供應品牌。

2. 2、新批次在試用前，提供試用服務，養(yǎng)細胞更放心。

3. 3、每個批次產量800-2000升，試用滿意的實驗室批號優(yōu)先鎖定，保證大多數(shù)項目兩年不需換批次，細胞試驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

4. 4、每年按廠家生產順序，會有多批次平行供應，每個實驗室專屬批號管理，保證供貨穩(wěn)定。

5. 5、為Ausbian血清用戶免費提供申報支持，具有完整的檢測報告，為各類項目的申報提供支持。（同時為血清VIP用戶在支原體檢測、方法學驗證等方面，提供更多免費延伸性技術幫助。）

6. 6、針對特殊科研項目，可提供3-5個平行批次，讓試驗人有更多選擇空間。

7. 7、為Ausbian血清提供免費代儲存服務，為儲存空間不足的實驗室提供可靠的血清倉儲保護，按要求隨時發(fā)貨。

8. 8、Ausbian血清從出廠，到實驗室，全程低溫冷鏈保護，確保血清無反復凍融。

9. 9、免費真品保障，每個血清瓶身加貼Viansaga®易破損防偽標簽，Ausbian品牌真品保護，逢假必究，為實驗室做好售后保障。

10. 10、免費無憂售后，所有實驗室簽收的Ausbian胎牛血清，從簽收日開始計算，一年之內，血清在妥善保管、未開封未融化、且不影響二次銷售的情況下，均可享受無條件退貨或換貨的售后保障。

11. 11、免費專業(yè)幫助，匯集近二十年，千萬個血清用戶細胞培養(yǎng)經驗，為各種細胞培養(yǎng)提供問題梳理分析，解決方案參考。