支原體污染解決方案

支原體污染在世界范圍內(nèi)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室中，屬于比較常見(jiàn)的一類污染。細(xì)胞污染一旦污染了支原體，會(huì)給細(xì)胞培養(yǎng)帶來(lái)一系列嚴(yán)重的后果。

本期內(nèi)容，就細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，支原體污染的危害、如何預(yù)防支原體污染、如何祛除支原體污染做解讀。

一

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支原體污染的危害

支原體個(gè)頭很小，可以感染多種真核細(xì)胞系，包括研究中常用的人類和動(dòng)物細(xì)胞系。雖然支原體感染的前期，可能并不總是導(dǎo)致受感染細(xì)胞發(fā)生明顯變化，但它會(huì)對(duì)細(xì)胞生理學(xué)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生重大影響。

支原體影響細(xì)胞生長(zhǎng)的主要方式之一是改變細(xì)胞代謝。支原體已被證明會(huì)耗盡培養(yǎng)基中的葡萄糖和氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，從而導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖減少。此外，支原體會(huì)產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞有毒的代謝廢物，例如過(guò)氧化氫和氨。

支原體感染還可以改變受感染細(xì)胞中基因和蛋白質(zhì)的表達(dá)。研究表明，支原體可以誘導(dǎo)基因表達(dá)和可變剪接的變化，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)表達(dá)和細(xì)胞功能的改變。例如，支原體感染已被證明可以下調(diào)參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的基因，并上調(diào)參與炎癥和免疫反應(yīng)的基因。

支原體影響細(xì)胞生長(zhǎng)的另一種方式是誘導(dǎo)細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)。支原體感染已被證明可激活細(xì)胞應(yīng)激通路，如未折疊蛋白反應(yīng)和自噬，這可導(dǎo)致細(xì)胞功能改變和細(xì)胞活力降低。

支原體還會(huì)影響受感染細(xì)胞在檢測(cè)和實(shí)驗(yàn)中的行為。支原體污染會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可變性增加、再現(xiàn)性降低以及假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。此外，支原體可以改變細(xì)胞對(duì)藥物和其他刺激的反應(yīng)，這可能導(dǎo)致關(guān)于藥物療效或毒性的錯(cuò)誤結(jié)論。

總之，支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和行為以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生重大影響。研究人員應(yīng)采取適當(dāng)措施預(yù)防、檢測(cè)支原體污染。

二

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支原體污染的預(yù)防

防止支原體污染的第一步是保持無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。所有設(shè)備和表面都必須使用適當(dāng)?shù)脑噭┒ㄆ谇鍧嵑拖?，培養(yǎng)箱水槽等水浴環(huán)境，也應(yīng)防止消毒劑成分。此外，在處理細(xì)胞培養(yǎng)物時(shí)應(yīng)佩戴手套和實(shí)驗(yàn)室外套等個(gè)人防護(hù)設(shè)備，以防止意外污染。

德國(guó)Minerva Biolabs生產(chǎn)

支原體祛除噴霧

Mycoplasma-off

德國(guó)Minerva Biolabs生產(chǎn)

水槽支原體預(yù)防試劑

Water Shield

另一個(gè)重要措施是在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程的所有步驟中使用無(wú)菌試劑和培養(yǎng)基。這包括使用無(wú)菌移液器、過(guò)濾器和其他一次性設(shè)備。所有培養(yǎng)基和試劑都應(yīng)適當(dāng)儲(chǔ)存以防止污染。

應(yīng)盡可能使用之前經(jīng)過(guò)測(cè)試和證明不含支原體的細(xì)胞系。定期檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物是否存在支原體污染也很重要，即使使用經(jīng)過(guò)認(rèn)證的細(xì)胞系也是如此。

三

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支原體的檢測(cè)

如何檢測(cè)支原體前期內(nèi)容我們也有詳細(xì)講過(guò)，有常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒以及qPCR檢測(cè)試劑盒兩大類可供選擇。

具體內(nèi)容可以參考下面這篇文章：

『支原體檢測(cè)方法』到底應(yīng)該怎樣選？

四

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支原體的祛除

如果在細(xì)胞培養(yǎng)物中檢測(cè)到支原體污染，必須立即采取措施消除污染。第一步是將受影響的培養(yǎng)物與其他細(xì)胞培養(yǎng)物隔離，以防止污染擴(kuò)散。

受影響的培養(yǎng)物應(yīng)該被丟棄，并對(duì)環(huán)境進(jìn)行清潔，參考支原體預(yù)防這一章節(jié)的內(nèi)容。新的培養(yǎng)物應(yīng)該從冷凍儲(chǔ)備或無(wú)支原體細(xì)胞系開(kāi)始。

針對(duì)不同類型的培養(yǎng)物，還可選擇用于細(xì)胞中的支原體祛除試劑：

Zell Shield

對(duì)于費(fèi)力擴(kuò)增的細(xì)胞（如已染，或經(jīng)過(guò)體外刺激），如果細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有支原體污染，但此細(xì)胞又不愿丟棄，希望繼續(xù)培養(yǎng)，推薦使用MB公司生產(chǎn)的復(fù)合抗生素Zell Shield。

Mynox

無(wú)法長(zhǎng)期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收獲液，則推薦使用德國(guó)MB公司的Mynox® ，處理3小時(shí)，直接殺除。

Mynox Gold

可以培養(yǎng)超過(guò)一個(gè)月的細(xì)胞，則推薦使用德國(guó)MB公司的Mynox® Gold，直接殺除+鞏固防護(hù)兩步處理。