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Biocoll細(xì)胞分離液正確分離方法和操作時的注意事項

更新時間:2022-05-23  |  點(diǎn)擊率:950
  Biocoll細(xì)胞分離液是最早由德國Biochrom公司推出的新一代分離液。它除了可分離淋巴細(xì)胞外,更常用于胰島細(xì)胞的分離。胰島細(xì)胞的移植是一種有效的糖尿病新型療法,可解決特別是I型糖尿病患者的胰島細(xì)胞不足及功能低下的問題。
  Biocoll細(xì)胞分離液分離方法會影響胰島的產(chǎn)率和存活率:
  因此,取材時需要注意
  1.胰臟應(yīng)快速取材,保持包膜完整。
  2.對胰臟進(jìn)行評估,在消化酶灌注前去除多余的脂肪和殘留的十二指腸和脾臟。
  3.消化過程不宜進(jìn)行震蕩,以保證胰腺組織被灌注的消化酶液消化,而不是被胰腺所釋放的胰蛋白酶消化。
  4.要保證胰島的包膜完整,消化不能太充分。寧可不足,也不可過頭,否則會影響胰島純化的產(chǎn)率。
  Biocoll細(xì)胞分離液操作步驟及注意:
  1.取全血,使用等量PBS稀釋。(全血:HBSS=1:1)
  2.取離心管,加入與血稀釋液等量的PBS于管底,將血液稀釋液小心加至PBS液面上層。(小心不要使兩種溶液混合,吸頭接近液面,貼壁緩慢加入,尤其是兩種溶液剛接觸到的時候,一定要慢!慢!再慢?。?/div>
  3.離心:800g,30min,需要將制動降至低,即離心機(jī)自然降速至0,離心完畢將得到如圖所示分層(一定要自然降速,或者只有1-2成的制動)
  4.吸取白膜層至新15mL離心管中。
  5.白膜層液體加10~15mlPBS離心,300g,10min,棄上清。沉淀再加PBS清洗一次,棄上清。
  6.沉淀加入正常培養(yǎng)的*培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),2~3小時,使單核細(xì)胞貼壁。
  7.鏡下觀察細(xì)胞貼壁后,更換培養(yǎng)基,去除未貼壁細(xì)胞,保留下來的即為所需的單核細(xì)胞。
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